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成蝦的哪一個器官是診斷 WSSV 最好的採樣部位?
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白點病毒可存在於許多蝦的組織中,當選擇採樣的目標組織時,要考慮三個因 素:1.含有較多的病毒,2.容易採樣,3.對蝦的傷害較小;因此選出腹(泳) 足、鰓、蝦血與胸足作為診斷的採樣目標。基本上因為腹足容易剪得且含有 較少的 PCR 抑制物,因此最常被選用。鰓是其次被推薦的病毒診斷採樣目標,因為對蝦比較不會造成太大的傷害,且可用來偵測許多其他病毒,如:IHHNV、YHV/GAV 和 TSV 等。
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何時是種蝦最好的診斷時期?
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以 PCR 檢測種蝦最好的時機是在首次產卵後。首先,在產卵後檢測可以節省診斷費用,無法產卵的種蝦當然沒有檢測的必要,而產卵失敗的種蝦,多半已屬於嚴重感染。
其次,根據研究發現 PCR 陰性的卵與產卵後仍為 PCR 陰性的種蝦之間有相當高的關聯性,如果只選擇產卵後仍為PCR陰性的種蝦所產的卵,將能降低引入白點症病毒到種苗場的風險。已知一些造成壓力的因素如:天氣的改變、不良的水質,都能誘發白點症病毒的自我複製,而產卵對種蝦而言也是一種很大的壓力。如果種蝦在產卵後仍為 PCR 陰性,幾可確定這隻種蝦不帶有白點症病毒。
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必須採集多少隻PLs 才會達到足夠的信賴區間(confidence level)?
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150 隻是大多數研究者所認同的數目。如果要在非常大(如:個體數超過 150,000 隻)的母群體中確認是否有被感染的個體,並且到達 95% 的信賴區間,在統計學上認為至少需採樣 150 隻。但不要將這 150 隻 PL一起萃取,因為大量的稀釋會產生偽陰性的結果;建議將這 150 隻 PL 分成 5 群,每群 30 隻且分別萃取 DNA 並分別跑 PCR。
有一些加壓篩選程序 (challenge procedures),如採樣前以福馬林處理,被廣泛的應用在 PL 的採樣上。基本上,主要的概念是採樣時要選擇體型較小且較弱的動物。
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在養成池要多久採樣一次?每次採樣要取多少隻蝦?
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關於養成池的檢測次數並沒有任何硬性規定,一般而言,建議每兩星期檢測一次。但是只要養成池內有任何不尋常的徵兆發生時,就是要檢測的時候。
建議的最小採樣數目是 5 隻,可以將這 5 隻蝦採集腹(泳)足後集中一起萃取 DNA 並一起跑 PCR。如果要採 10 隻蝦,最好分成 2 群分別檢測。和 PL 一樣,應選擇體型較小、較弱且靠近池邊的動物。
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