|
IQ2000TMKit
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
IQ REAL System
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
偽陰性的 PCR 檢驗結果多半肇因於 DNA 品質不良或 PCR 反應失敗，內部控制組(internal control) 是預防這個問題最好的策略。就 IQ2000TM 系統而言，內控制組（又稱為宿主基因 house-keeping gene）是構成試劑的成分之一，使用者可以很容易的利用內部控制組來監控 DNA 品質和 PCR 程序。 偽陽性的 PCR 檢驗結果多半肇因於產物的污染，或在萃取 DNA 與加入反應試劑時的交互污染。要避免 PCR 產物污染後續實驗，最好是將執行電泳的空間與萃取樣品、配製試劑的空間區隔開來，並安排在相隔較遠的地方。而訓練好操作人員，使他們能夠正確的操作實驗，是避免交互污染問題的最佳方式。 |
|
藉由試劑內所附的定量陽性標準品即可監控系統的靈敏度，就 IQ2000TM 系統而言，可將陽性標準品以 yeast tRNA 稀釋至 10 copy/ul，並以此稀釋的標準品做為監控靈敏度的依據。假如 10-copy 標準品的實驗結果是形成 3 個亮帶( 910、550 和 296 bp)，表示靈敏度太高，這時第一次擴增反應需要減少 2 至 3 圈；反而言之，假如 10-copy 標準品沒有形成任何亮帶，第一次擴增反應就需要增加 2 至 3 圈，以提高靈敏度。 |
|
情況視所檢測檢體的種類而定，因為宿主基因是根據對蝦基因組而設計的，只有對蝦類的檢體才能形成正確大小的 PCR 產物。陰性對蝦類的檢體是一定要形成宿主基因的亮帶，來確認 DNA 品質，以避免誤判成偽陰性結果。至於其他甲殼類動物也可能會形成宿主基因的亮帶，但部分甲殼類動物的 PCR 產物大小會與對蝦有些許差異。如果是池土、池水或餌料等樣品，將不會形成宿主基因的亮帶。 |
如何避免偽陰性和偽陽性的PCR檢驗結果？