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"PCR陰性"的意義為何？

首先我們必須先定義"偵測極限 (detection limit)"，它的意義就是：只要最初的核酸模版(template) 數目高於偵測極限，PCR 系統就可不斷再現的偵測出陽性結果。就 IQ2000^TM WSSV的系統而言，它的偵測極限是每反應 10 隻病毒。

當病毒顆粒數目高於偵測極限，就能夠得到PCR陽性結果。如果反應的試管裡沒有任何病毒顆粒，結果當然是陰性。但當病毒數目低於偵測極限，如試管裡只有3隻病毒時，其結果就變成了統計議題，端視機率而定，亦結果有時是陽性但有時卻是陰性。

所以，PCR 陰性的意義是：這個特定的樣品不帶有病毒，或其病毒數目低於偵測極限。

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如何得知熱循環加熱器(PCR cycler)是否在正常的狀況？

首先，要求機器供應商每年定期調整熱循環加熱器的溫控，是屬於消費者的權利。然而，亦可從 IQ2000^TM WSSV 系統中提供的 10-copy 標準品監控 PCR 效率，以了解熱循環加熱器是否正常的運作。假如 10-copy 標準品的實驗結果是形成 3 個亮帶 (910、550 和 296 bp)，表示熱循環加熱器靈敏度太高，這時第一次擴增反應需要減少 2 至 3 圈；反而言之，假如 10-copy標 準品沒有形成任何亮帶，第一次擴增反應就需要增加 2 至 3 圈，以提高靈敏度。

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二次PCR (nested PCR)有何優點？

二次 PCR 的設計主要有兩項優點，首先，二次 PCR 能有效地提高靈敏度，就病毒診斷而言，靈敏度是非常重要的。其次，二次 PCR 能夠增加專一性，因為只有真正來自第一次 PCR 的產物才能成為二次 PCR 反應的有效模版。

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